Ein Reagens zur Blutgruppenbestimmung muss alle geprüften Blutproben agglutinieren, die das Agglutinogen enthalten, das dem Antikörper oder einer anderen auf der Etikette angegebenen agglutinierenden Substanz entspricht.

Wird ein Reagens in der vom Hersteller empfohlenen Weise verwendet, so dürfen folgende Faktoren oder Erscheinungen nicht auftreten:

a.

hämolytische Eigenschaften,

b.

Antikörper oder sonstige agglutinierende Substanzen ausser denen, die auf der Etikette angegeben sind,

c.

bakterielle Produkte, die möglicherweise falsche positive oder falsche negative Reaktionen verursachen,

d.

Pseudoagglutination durch Geldrollenbildung,

e.

Zonenphänomen (Prozone).

Der Titer wird durch immer erneute Verdünnung des zu untersuchenden Reagens auf das Doppelte in einem geeigneten Medium gemessen. Jeder Verdünnung wird die gleiche Menge einer Erythrozyten—Aufschwemmung zugefügt. Der Titer ist der reziproke Wert der Zahl der stärksten Serumverdünnung, in der eine mikroskopisch sichtbare Agglutination auftritt; die Verdünnung wird einschliesslich des Volumens der Blutkörperchenaufschwemmung in dem Gesamtvolumen berechnet.

Bei Anti—A, Anti—B oder sonstigen Reagenzien, die auf Objektträgern verwendet werden sollen, wird die Avidität durch die Zeit ausgedrückt, die für eine Agglutination auf dem Objektträger erforderlich ist.

Die Weltgesundheitsorganisation hat für Anti—A— und Anti—B—Reagenzien zur Blutgruppenbestimmung internationale Normen festgelegt, und für Reagenzien anderer Spezifität werden zurzeit Normen ausgearbeitet. Ein internationales Standardpräparat enthält laut Definition eine bestimmte Anzahl internationaler Einheiten pro mg oder ml; diese Definition ist unabhängig von den Titern, die bei einzelnen Zubereitungen roter Blutkörperchen beobachtet werden³.

Wird ein Reagens unter den vorn Hersteller empfohlenen Bedingungen gelagert, so sollen seine erforderlichen Eigenschaften mindestens ein Jahr lang erhalten bleiben.

Das Verfalldatum eines Reagens in flüssiger Form laut Etikette liegt höchstens ein Jahr nach der letzten zufriedenstellenden Wirksamkeitsprüfung. Durch Wiederholung der Wirksamkeitsprüfung kann das Verfalldatum um jeweils ein Jahr hinausgeschoben werden.

Das auf der Etikette anzugebende Verfalldatum für Trockenreagenzien richtet sich nach den Ergebnissen der Haltbarkeitsversuche; es ist von den staatlichen Kontrollbehörden zu genehmigen.

Reagenzien zur Blutgruppenbestimmung können in flüssiger oder getrockneter Form konserviert werden. Trockenreagenzien sind unter einer Atmosphäre von Inertgas oder einem Vakuum in dem Glasbehälter aufzubewahren, in dem sie getrocknet worden sind und der so verschlossen wird, dass keine Feuchtigkeit eindringen kann. Ein Trockenreagens darf höchstens 0,5% seines Gewichts verlieren, wenn es durch weiteres Trocknen über Phosphorpentoxyd bei einem Druck von nicht mehr als 0,02 mm Hg über 24 Stunden getestet wird.

Reagenzien sind unter Beachtung der Asepsis herzustellen und von bakterieller Verunreinigung freizuhalten. Zur Vermeidung von Bakterienwachstum kann die zuständige staatliche Behörde bestimmen, dass dem Reagens (oder den für die Trockenreagenzien bestimmten Lösungsmitteln) ein Antiseptikum und/oder Antibiotikum zugefügt wird, sofern das Reagens auch mit der hinzugefügten Substanz weiterhin die Voraussetzungen an Spezifität und Wirksamkeit erfüllt.

Seren menschlichen Ursprungs zur Blutgruppenbestimmung müssen mindestens 2,5 mg Eiweiss—Stickstoff pro ml des flüssigen oder wiederhergestellten Serums enthalten.

Die Reagenzien, gleichgültig, ob in flüssiger Form oder nach der Wiederherstellung, müssen transparent sein und dürfen weder Sedimente noch Gele oder sichtbare Teilchen enthalten.

Die für den internationalen Austausch bestimmten Reagenzien zur Blutgruppenbestimmung sollen besser nicht künstlich gefärbt werden, zumindest so lange als nicht ein internationales Übereinkommen ein einheitliches System zulässt. Allfällige Farbstoffzusätze dürfen die Agglutinationseigenschaften nicht beeinträchtigen.

Reagenzien zur Blutgruppenbestimmung sind auf solche Weise und in solchen Mengen zu verteilen, dass das in einem Behälter befindliche Reagens nicht nur zur Durchführung von Prüfungen mit den unbekannten Blutkörperchen, sondern auch mit positiven und negativen Kontroll—Blutkörperchen ausreicht. Die in einem Behälter befindliche Menge muss so gross sein, dass der Inhalt gegebenenfalls zur Durchführung der in diesem Protokoll beschriebenen Wirksamkeitsprüfungen verwendet werden kann.

Das Herstellerlaboratorium hat über alle Produktionsstufen und Kontrollen der Reagenzien zur Blutgruppenbestimmung schriftliche Protokolle zu führen. Es hat angemessene Proben aller ausgegebenen Reagenzien aufzubewahren, bis mit hinreichender Wahrscheinlichkeit angenommen werden kann, dass der Herstellungssatz nicht mehr verwendet wird.

Die zur Blutgruppenbestimmung verwendeten Reagenzien können Substanzen menschlichen, tierischen, pflanzlichen (oder mineralischen) Ursprungs enthalten, die einen als den wirksamen Anteil, die anderen als die notwendigen Hilfsmittel zur Verstärkung der Wirksamkeit und Erhaltung der Stabilität des Reagens.

Aus technischen Gründen sind diese Reagenzien nach dem Ursprung ihres wirksamen Anteils in drei Gruppen eingeteilt. Das bedeutet nicht, dass die Reagenzien menschlichen Ursprungs ausschliesslich Substanzen menschlichen Ursprungs enthalten oder dass tierische oder pflanzliche Reagenzien keine Substanzen menschlichen Ursprungs enthalten können.

Auf jedem definitiven Behälter ist eine schwarz auf weiss gedruckte Etikette mit folgenden Angaben in englischer und französischer Sprache anzubringen:

1.

Name und Anschrift des Herstellers

2.

Name des Reagens laut Überschrift in der entsprechenden Beschreibung

3.

Gegebenenfalls Name und Menge des Antiseptikums und/oder Antibiotikums, bzw. Angabe des Nichtvorhandenseins

4.

Volumen oder, bei getrockneten Reagenzien, Volumen und Zusammensetzung der zur Auflösung benötigten Flüssigkeit

5.

Verfalldatum

6.

Nummer des Herstellungssatzes.

Ausserdem hat diese Etikette oder die Etikette auf der Packung, in der sich mehrere definitive Behälter befinden, oder der den Behältern beigefügte Prospekt folgende Angaben zu enthalten:

1.

Vollständiger Name und Anschrift des Herstellers

2.

Name des Reagens laut Überschrift in der entsprechenden Beschreibung

3.

Volumen oder, bei getrockneten Reagenzien, Volumen und Zusammensetzung der zur Auflösung benötigten Flüssigkeit

4.

Datum der letzten Wirksamkeitsprüfung

5.

(Gegebenenfalls) Verfalldatum

6.

Nummer des Herstellungssatzes

7.

Angemessene Beschreibung der vom Hersteller empfohlenen Verwendungsmethode

8.

Angaben über Aufbewahrungsbedingungen für ungeöffnete Ampullen und Vorsichtsmassnahmen nach dem Öffnen

9.

Genaue Angaben über die Zusammensetzung, gegebenenfalls auch über das Antiseptikum und/oder Antibiotikum

10.

Hinweis auf den Gehalt oder das Nichtvorhandensein von Stoffen menschlichen Ursprungs.

Jeder Sendung ist eine Bescheinigung gemäss Artikel 4 des Übereinkommens und der Anlage zu diesem Protokoll beizugeben. Muster für die Etiketten und Prospekte sind diesem Protokoll beigefügt.

i) Anti—A Blutgruppenserum (menschlich)

Anti—A Serum wird aus dem Blut ausgewählter Personen der Gruppe B gewonnen, die durch rote Blutkörperchen oder durch spezifische Substanzen der Gruppe A immunisiert sein können. Anti—A Serum agglutiniert menschliche rote Blutkörperchen, die A—Agglutinogene enthalten, d. h. diejenigen der Gruppen A und AB einschliesslich der Untergruppe A₁, A₂, A₁B und A₂B; es agglutiniert nicht die menschlichen roten Blutkörperchen, die keine A—Agglutinogene enthalten, d. h. diejenigen der Blutgruppen 0 und B.

Wirksamkeit

Titration

Ein Anti—A Serum ist getrennt mit Aufschwemmungen von A₁—, A₂— und A₂B—Blutkörperchen parallel zu dem aufgelösten, aber unverdünnten internationalen Standardpräparat des Anti—A Blutgruppenserums oder einem entsprechenden Vergleichspräparat zu titrieren. Die Wirksamkeit des Serums darf in keinem Fall weniger als 64 Internationale Einheiten pro ml betragen.

Bestimmung der Avidität

Wird Anti—A Serum auf einem Objektträger mit einer gleichen Menge einer 5 bis 10prozentigen Aufschwemmung von A₁—, A₂— und A₂B—Blutkörperchen gemischt, so muss die Agglutination bei jeder Aufschwemmung innerhalb der doppelten Zeit auftreten, die erforderlich ist, wenn der gleiche Versuch mit dem aufgelösten, aber unverdünnten internationalen Standardpräparat des Anti—A Blutgruppenserums oder einem Standardpräparat gleicher Avidität durchgeführt wird.

ii) Anti—B Blutgruppenserum (menschlich)

Anti—B Serum wird aus dem Blut ausgewählter Personen der Gruppe A gewonnen, die durch rote Blutkörperchen oder spezifische Substanzen der Gruppe B immunisiert sein können. Anti—B Serum agglutiniert menschliche rote Blutkörperchen, die B—Agglutinogen enthalten, d. h. diejenigen der Blutgruppen B und AB; es agglutiniert nicht die menschlichen roten Blutkörperchen, die kein B—Agglutinogen enthalten, d. h. diejenigen der Blutgruppen 0 und A.

Wirksamkeit

Titration

Ein Anti—B Serum ist mit einer Aufschwemmung von B—Blutkörperchen parallel zu dem aufgelösten, aber unverdünnten internationalen Standardpräparat des Anti—B Blutgruppenserums oder einem entsprechenden Vergleichspräparat zu titrieren. Die Wirksamkeit des Serums darf nicht weniger als 64 Internationale Einheiten pro ml betragen.

Bestimmung der Avidität

Wird Anti—B Serum auf einem Objektträger mit einer gleichen Menge einer 5— bis 10prozentigen Aufschwemmung von B—Blutkörperchen gemischt, so muss die Agglutination innerhalb der doppelten Zeit auftreten, die erforderlich ist, wenn der gleiche Versuch mit dem aufgelösten, aber unverdünnten internationalen Standardpräparat des Anti—B-Blutgruppenserums oder mit einem Standardpräparat gleicher Avidität durchgeführt wird.

iii) Anti—A plus Anti—B (Gruppe 0) Blutgruppenserum (menschlich)

Anti—A plus Anti—B (Gruppe 0) Serum wird aus dem Blut ausgewählter Personen der Gruppe 0 gewonnen, die durch rote Blutkörperchen oder spezifische Substanzen der Gruppe A und der Gruppe B immunisiert sein können. Anti—A plus Anti—B (Gruppe 0) Serum agglutiniert menschliche rote Blutkörperchen, die A— und/oder B—Agglutinogene enthalten, d. h. diejenigen der Gruppe A einschliesslich der Untergruppen A₁ und A₂, der Gruppe B und der Gruppe AB einschliesslich der Untergruppen A₁B und A₂B; es agglutiniert nicht die menschlichen roten Blutkörperchen, die keine A— oder B—Agglutinogene enthalten, d. h. diejenigen der Gruppe 0. Es agglutiniert menschliche rote Blutkörperchen, die das A_x—Agglutinogen enthalten (die im allgemeinen durch Anti—A Serum von Blutspendern der Gruppe B nicht agglutiniert werden).

Wirksamkeit

Titration

Ein Anti—A plus Anti—B (Gruppe 0) Serum ist getrennt mit Aufschwemmungen von A₁-, A₂— und A₂B—Blutkörperchen parallel zu dem aufgelösten, aber unverdünnten internationalen Standardpräparat des Anti—A Blutgruppenserums oder einem entsprechenden Vergleichspräparat zu titrieren. Ferner ist es mit einer Aufschwemmung von B—Blutkörperchen parallel zu dem aufgelösten, aber unverdünnten internationalen Standardpräparat des Anti—B Blutgruppenserums oder einem entsprechenden Vergleichspräparat zu titrieren.

Die Wirksamkeit des Serums darf in keinem Fall weniger als 64 Internationale Einheiten pro ml betragen.

Unverdünnt verwendetes Anti—A plus Anti—B (Gruppe 0) Blutgruppenserum muss ebenfalls eine leicht erkennbare Agglutination der Blutkörperchen der Gruppe A_x hervorrufen.

Bestimmung der Avidität

Wird Anti—A plus Anti—B (Gruppe 0) Serum auf einem Objektträger mit gleichen Mengen von 5— bis 10prozentigen Aufschwemmungen von A₁—, A₂— und A₂B—Blutkörperchen gemischt, so muss die Agglutination innerhalb der doppelten Zeit auftreten, die erforderlich ist, wenn der gleiche Versuch mit dem aufgelösten, aber unverdünnten internationalen Standardpräparat des Anti—A Blutgruppenserums oder mit einem Standardpräparat gleicher Avidität durchgeführt wird. Wird Anti—A plus Anti—B (Gruppe 0) Serum auf einem Objektträger mit einer gleichen Menge einer 5— bis l0prozentigen Aufschwemmung von B—Blutkörperchen gemischt, so muss die Agglutination innerhalb der doppelten Zeit auftreten, die erforderlich ist, wenn der gleiche Versuch mit dem aufgelösten, aber unverdünnten internationalen Standardpräparat des Anti—B Blutgruppenserums oder einem Standardpräparat gleicher Avidität durchgeführt wird. Wird ein Anti—A plus Anti—B (Gruppe 0) Serum auf einem Objektträger mit einer gleichen Menge einer 5— bis 10prozentigen Aufschwemmung von A_x—Blutkörperchen gemischt, so muss die Agglutination innerhalb von 5 Minuten bei einer Temperatur von 18–25 °C auftreten.

Anti—Rh Blutgruppenseren jeder Spezifität können zu einer von zwei Arten gehören, die sich durch die Voraussetzungen unterscheiden, unter denen sie homologe Blutkörperchen agglutinieren. Bestimmte Seren, die als «komplett» bezeichnet werden, agglutinieren Blutkörperchen in einem Salzmedium. Andere, die als «inkomplett» bezeichnet werden, agglutinieren nur bei Vorhandensein bestimmter Kolloide wie Rindereiweiss oder mit Hilfe sonstiger besonderer Methoden.

Die meisten «inkompletten» Seren agglutinieren auch homologe rote Blutkörperchen, die in ihrem eigenen Serum oder Plasma auf Objektträgern aufgeschwemmt sind.

Die folgenden Voraussetzungen für die Wirksamkeit von Seren zur Bestimmung der Rh—Gruppe werden zu überprüfen sein, wenn internationale Standardpräparate zur Verfügung stehen werden.

i) Anti—D (Anti—Rh) Blutgruppenserum (menschlich)

Anti—D Serum wird aus dem Blut einer oder mehrerer Personen gewonnen, die durch D—Agglutinogen des Rh—Systems immunisiert sind. Es agglutiniert Aufschwemmungen menschlicher roter Blutkörperchen, die D—Agglutinogen enthalten, jedoch nicht solche von menschlichen roten Blutkörperchen ohne einen Gehalt an D—Agglutinogen.

Wirksamkeit

Titration

«Komplette» Anti—D Sera müssen einen Titer von mindestens 1:32 gegenüber CcDee—(R₁r) Blutkörperchen in einer 0,9prozentigen Kochsalzlösung haben.

«Inkomplette» Anti—D Sera müssen unter den vom Herstellungslaboratorium angegebenen Voraussetzungen einen Titer von mindestens 128 gegenüber CcDee—(R₁r) Blutkörperchen haben; neben der Agglutination aller Blutkörperchen, die D—Antigen enthalten, sollen sie nach Möglichkeit alle Blutkörperchen mit einem Gehalt an D^u—Antigen agglutinieren.

Bestimmung der Avidität

Anti—D Sera, die zur Verwendung auf Objektträgern bestimmt sind, müssen, nachdem sie auf einem Objektträger mit einer gleichen Menge einer 40— bis 50-prozentigen Aufschwemmung von CcDee—(R₁r) Blutkörperchen bei etwa 40 °C gemischt sind, innerhalb von 30 Sekunden eine sichtbare Agglutination bewirken; die Agglutination muss innerhalb von 120 Sekunden abgeschlossen sein.

ii) Anti—C (Anti—rh’) Blutgruppenserum (menschlich)

Anti—C Serum wird aus dem Blut einer oder mehrerer Personen gewonnen, die durch C—Agglutinogen des Rh—Systems immunisiert sind. Es agglutiniert Aufschwemmungen menschlicher roter Blutkörperchen, die C—Agglutinogen enthalten, jedoch nicht die menschlichen roten Blutkörperchen ohne einen Gehalt an C—Agglutinogen. In diesem Zusammenhang gilt das C—Agglutinogen als C^w—Agglutinogen enthaltend.

Die meisten diagnostischen Anti—C Seren enthalten sowohl «komplettes» Anti—C als auch «inkomplettes» Anti—D. Diese Seren sind deshalb für das C—Agglutinogen nur dann spezifisch, wenn die getesteten Blutkörperchen in einer 0,9prozentigen Kochsalzlösung aufgeschwemmt sind.

Wirksamkeit

Titration

Der Titer der Anti—C Seren muss mindestens 8 gegenüber Ccddee—(r’r) Blutkörperchen betragen.

Bestimmung der Avidität

Anti—C Seren, die zur Verwendung auf Objektträgern bestimmt sind (und keine Form von Anti—D enthalten dürfen), müssen, wenn sie auf einem Objektträger mit einer gleichen Menge einer 40— bis 50prozentigen Aufschwemmung von Ccddee—(r’r) Blutkörperchen bei etwa 40 °C gemischt sind, innerhalb von 30 Sekunden eine sichtbare Agglutination bewirken; die Agglutination muss innerhalb von 120 Sekunden abgeschlossen sein.

iii) Anti—E (Anti—rh’’) Blutgruppenserum (menschlich)

Anti—E Serum wird aus dem Blut einer oder mehrerer Personen gewonnen, die durch E—Agglutinogen des Rh—Systems immunisiert sind. Es agglutiniert Aufschwemmungen menschlicher roter Blutkörperchen, die E—Agglutinogen enthalten, jedoch nicht die menschlichen roten Blutkörperchen ohne einen Gehalt an E—Agglutinogen.

Wirksamkeit

Titration

Anti—E Seren («komplette» oder «inkomplette») sollen einen Titer von mindestens 8 gegenüber ccddEe—(r’’r) Blutkörperchen haben.

Bestimmung der Avidität

Anti—E Seren, die zur Verwendung auf Objektträgern bestimmt sind (und kein Anti—D enthalten dürfen), sollen, wenn sie auf einem Objektträger mit einer gleichen Menge einer 40— bis 50prozentigen Aufschwemmung von ccddEe—(r’’r) Blutkörperchen bei etwa 40 °C gemischt sind, innerhalb von 30 Sekunden eine sichtbare Agglutination bewirken; die Agglutination muss innerhalb von 120 Sekunden abgeschlossen sein.

iv) Anti—D plus C (Anti—Rh°rh’) Blutgruppenserum (menschlich)Anti—D plus E (Anti—Rh°rh’’) Blutgruppenserum (menschlich)

Seren der Spezifität Anti—D plus C und der Spezifität Anti—D plus E können unmittelbar aus dem Blut immunisierter Personen gewonnen oder durch Mischen von Anti—D— mit Anti—C oder Anti—E Serum hergestellt werden. In einem gegebenen Serum müssen beide Antikörper unter den vom Hersteller festgelegten Reaktionsbedingungen gleichzeitig wirksam sein. Jedes Serum muss mit allen roten Blutkörperchen eine Reaktion hervorrufen, die mit einem der beiden Antikörper, aus denen sich das Serum zusammensetzt, eine Reaktion zeigen würden; mit roten Blutkörperchen, die weder C— noch D—Agglutinogen enthalten, darf jedoch keine Reaktion auftreten. Die Titer dürfen nicht niedriger sein als bei den beiden Antikörpern, aus denen sich das Serum zusammensetzt; im Falle von Anti—D plus C (eine häufige Kombination im Serum immunisierter Personen) soll der Anti—C Titer jedoch nach Möglichkeit nicht weniger als 32 betragen. Ist ein Serum für Proben auf Objektträgern bestimmt, so soll die Agglutinationszeit bei allen Arten roter Blutkörperchen, die eine Reaktion zeigen, nicht geringer sein als mit den enthaltenen einzelnen Antikörpern.